線粒體活性氧產生速率（ROS）測試盒熒光法

簡要描述：線粒體活性氧產生速率（ROS）測試盒熒光法公司正在出售的產品：葡萄糖瓊脂英文名稱：Dextrose Agar 產品規格：250g Andrade氏糖類肉湯英文名稱：Andrade’s Carbohydrate Broth 產品規格：250g Korser氏枸椽酸鹽肉湯英文名稱：Korser Citrate Sodium Broth 產品規格：100g Endo培養基英文名稱：Endo Ag

產品型號：
廠商性質：經銷商
更新時間：2023-12-28
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生化檢測試劑盒

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詳細介紹

實驗方法學：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉動，每隔5～10分鐘轉動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

特別提醒：本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。

產品名稱：線粒體活性氧產生速率（ROS）測試盒熒光法

產品規格：100管/96樣

檢測方法：熒光法

產品貨號：BK-01S6410

產品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：

測定意義:

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。

正常情況下，細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態，細胞內活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破，細胞內活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。

因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗

樣本和試劑浪費！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png

注意事項：

1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數值在什么范圍？

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現配現用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管，可能是樣本中雜質的影響太大，為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

100mL PEG-TE-LiAc Solution PEG-TE-LiAc Solution 常溫保存

0.1mL×10 SURE化學感受態細胞 SURE Competent Cell -80℃保存

2 ug pNTAP- A pNTAP- A 低溫運輸，-20℃保存

B5培養基（不含瓊脂和蔗糖） B5 Medium(without agar or sucrose) 250g

2 ug pC-YFP pC-YFP 低溫運輸，-20℃保存

100U PreScissiom 蛋白 PreScissiom Protease -20℃保存

2 ug p53Blue p53Blue 低溫運輸，-20℃保存

萘啶酮酸(4.0mg) Nalidixic Acid 4.0mg*5

1g Xanthine 室溫干燥保存

1000支 0.5 mL RNase-free 離心管常溫

50 T 過氧化氫測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

線粒體活性氧產生速率（ROS）測試盒熒光法Hemopexin/HPX 糖蛋白β-1B抗體規格: 0.1mlRNF35 環指蛋白35抗體規格: 0.2ml

Rabbit Anti-chicken IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗雞IgM 規格: 0.1mlCatalase 過氧化抗體規格: 0.2ml

ADAMTS2 整合素樣金屬蛋白與凝2型抗體 0.2mlfactor XIII 凝因子13抗體(纖維蛋白穩定因子) 規格: 0.2ml

Transferrin(1F10) 轉鐵蛋白單克隆抗體規格: 0.1ml

SERPINB12 絲蛋白抑制劑B12抗體規格: 0.2ml

Granzyme D/B/E/N/G/F/H 顆粒D/B/E/N/G/F/H抗體規格: 0.1ml

Emerin Emerin蛋白抗體規格: 0.1ml

WIG-1/PAG608 野生型P53誘導基因1抗體 0.1ml

APLP2 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體規格: 0.2ml

MDR1/p-GP/CD243 (C-terminus) 多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體(C端) 規格: 0.1ml

TSP50 瘤/睪抗原20抗體規格: 0.2ml

Phospho-Histone H2A.X (Tyr143) 磷酸化組蛋白H2AX抗體規格: 0.1ml

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